농도에 따른 흡광도 - nongdo-e ttaleun heubgwangdo

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흡광이란?
주문형 웨비나
흡광 개요
흡광은 무엇으로 측정합니까?
분광광도계 대비 Plate Reader
흡광 ELISA 프로토콜은 어떻게 실행합니까?
미광이 광학밀도(OD)에 어떻게 영향을 미칩니까?
Cell Viability, 세포 생장, 세포독성 assay(MTT, XTT, MTS)
고객 후기: 흡광 Plate Reader로 DNA/RNA 합성기 검사
고객 후기: 균막 연구에 사용되는 흡광 Plate Reader
흡광 관련 자료
동영상 및 웨비나
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개요
자료
관련 제품 및 서비스

흡광이란?

Optical Density(OD) 라고도 알려져 있는 흡광도(Absorbance)는 용액에 의해 흡수되는 빛의 양입니다. 투과율은 용액을 통과하는 빛의 양입니다. 흡광과 % 투과율은 일반적으로 분광광도법에 사용되며 다음과 같이 표시할 수 있습니다.

흡광 수식

A = Log10(I0/I)

이때 I0는 입사광의 세기이며, I는 샘플을 통과한 광선의 세기입니다.

T = I/I0 및 %T = 100(T)

이 수식은 % 투과율로부터 흡광을 계산할 수 있도록 합니다.

A = 2 - log10(%T)

비어-람베르트 법칙을 이용한 농도 결정

샘플의 농도는 다음과 같이 표시되는 비어-람베르트 법칙을 이용한 흡광으로부터 계산할 수 있습니다.

A = ε * c * p

이때, ε은 몰 흡수도 또는 몰 흡광 계수로, 단위는 L mol-1 cm-1입니다.
c는 mol/L로 표시된 용액의 용질의 농도입니다.
p는 샘플의 경로 길이로, 큐벳 1cm와 같이 cm로 표시됩니다.

Molecular Devices에서 최초로 UV 기능을 탑재한 Microplate Reader를 출시한 이후에야 Microplate 상에서 UV 측정이 가능해졌습니다. 그 이후, DNA, RNA, 단백질의 마이크로플레이트 측정이 매우 많이 사용되고 있습니다. 흡광 측정법과 흡광을 활용하는 몇 가지 핵심 응용 분야에 대해 더 알아보세요.

주문형 웨비나

흡광 기반 assay 응용 분야 탐색: 바이러스 연구에서 대마 연구까지

SpectraMax® Microplate Reader와 SoftMax® Pro 소프트웨어를 사용한 흡광 판독값으로 Microplate나 Cuvette에서 샘플의 광학밀도를 측정할 수 있습니다. 이 소프트웨어의 강력한 분석 도구는 표준 곡선과 계산된 데이터를 생성합니다. GMP/GLP에 따라 규제되는 실험실에는 시스템에 SoftMax Pro GxP 규정 준수 소프트웨어가 포함됩니다.

핵심 하이라이트:

흡광도(Absorbance) 측정 작업은 어떻게 이루어집니까?
ELISA를 이용한 면역글로불린(Ig) 검출 - 더 많은 감염병 및 면역 반응 연구 방식
흡광 측정을 통한 맥주 및 와인의 분석 간소화
ELISA 방법을 이용한 대마초의 총 아플라톡신 확인

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흡광 개요

흡광 정의

흡광도(Absorbance) 측정 작업은 어떻게 이루어집니까?
흡광은 무엇으로 측정합니까?
ELISA 프로토콜은 어떻게 실행합니까?
미광이 광학밀도(OD)에 어떻게 영향을 미칩니까?

흡광 응용 분야

Cell Viability, 세포독성, 세포 생장(MTT, XTT, MTS)
DNA/RNA 정량화
Enzyme Kinetics, Bacterial/Microbial Growth
Endotoxin Assay
ELISA/Bioassay(항체, Cytokine 등의 정량)
Micro-volume 응용 분야
PathCheck 기술을 이용한 광학밀도 측정
단백질 정량(BCA, Bradford, Lowry Assay)

Spectrophotometer와 Absorbance Plate Reader는 샘플에 흡수되는 빛의 양을 측정합니다. 자외선(UV) 범위에서 빛을 검출할 수 있는 Microplate Reader는 샘플 표지 없이도 핵산(DNA 및 RNA)이나 단백질의 농도를 직접 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 측정 대상 물질에 따라 특정 파장의 빛이 샘플을 통과하면, 마이크로플레이트 웰의 다른 쪽에 있는 검출기가 웰 내 샘플에 흡수된 원광의 양을 측정합니다.
흡광은 무엇으로 측정합니까?
흡광은 분광광도계나 Microplate Reader를 이용하여 측정합니다. 이 기기는 지정된 파장의 빛을 샘플에 비추고 샘플이 흡수하는 빛의 양을 측정합니다.

분광광도계 대비 Plate Reader
표준 분광광도계는 한 번에 하나의 샘플의 흡광을 측정하며, 일반적으로 빛이 수평으로 전파되는 Cuvette에 배치합니다. 흡광 Plate Reader는 더 많은 처리량을 제공하며 각 Well을 수직으로 통과하게 빛을 보내 Microplate(일반적으로 96 Well 또는 384 Well까지도)에 담긴 샘플의 흡광을 측정할 수 있습니다.
흡광 Plate Reader에 대해 살펴보기
흡광 ELISA 프로토콜은 어떻게 실행합니까?
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)는 샘플 내 항원을 정량적으로 검출하는 데 사용되는 방법입니다. 대부분의 ELISA는 마이크로플레이트에서 실행됩니다. 마이크로플레이트 웰의 바닥은 대상 항체가 직접 또는 항체를 통해 부착될 수 있는 단단한 표면 역할을 합니다. 기질과 반응하여 유색 용액을 생성하는 효소 접합체가 항원을 검출하는 데 사용됩니다. Microplate washer는 비특이적, 미결합 물질을 Well에서 세척하는데 사용되며, 흡광 ELISA Plate Reader는 표적 항원이 존재하는 경우에 발생하는 색 변화를 검출합니다.
ELISA에 대해 살펴보기
미광이 광학밀도(OD)에 어떻게 영향을 미칩니까?
미광은 분석기기의 검출기에 도달하는 원치 않는 빛을 일반적으로 지칭하는 용어입니다. 흡광 판독에 미치는 미광의 영향은 보통 예상치 못하게 낮은 OD입니다. 측정된 흡광은 실제 샘플의 흡광보다 낮습니다. 이는 일반적으로 선형성에 영향을 미치며, 2.0~2.5 이상의 OD를 측정하는 경우에 가장 크게 나타납니다. 미광은 사용자가 수정할 수 없으며, 일반적으로 사용자 오류로 인해 발생하기 보다는 여기 필터의 성능 저하와 같은 광학적 구성요소 등의 원인에 의한 것일 수 있습니다. 분광광도계와 흡광 Plate Reader는 일반적으로 미광을 최소화하는 기능을 포함합니다.
- PathCheck 기술을 통해 광학 밀도 측정치를 자동으로 1cm 노정으로 교정
Cell Viability, 세포 생장, 세포독성 assay(MTT, XTT, MTS)
MTT, XTT, MTS와 같은 테트라졸륨염을 사용한 비색 Assay는 세포 생장과 세포독성 측정에 사용할 수 있습니다. 예를 들어, MTT assay는 블루 포마잔을 형성하는 생존 세포의 Enzyme에 의한 MTT의 감소에 따라 달라지며, 이는 흡광 측정을 통해 정량화될 수 있습니다. Assay의 선택은 원하는 워크플로와 요구 시간에 따라 달라질 수 있습니다.
응용 분야 노트를 읽고 그 중 몇 가지 방법에 대해 살펴보십시오.
- 측색 판독으로 cell viability 및 생장 평가
고객 후기: 흡광 Plate Reader로 DNA/RNA 합성기 검사
OligoMaker ApS는 DNA/RNA 합성기의 검사에 SpectraMax 190 리더기를 사용합니다.
“저희가 구축한 DNA/RNA 합성기를 검사할 때 SpectraMax 190가 중요한 단계로서 사용됩니다. 얼마나 많은 DNA/RNA가 DNA/RNA 합성기에서 합성되었는지 확인하는 프라이머와 프로브를 정량화해야 하기 때문이죠.”
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고객 후기: 균막 연구에 사용되는 흡광 Plate Reader
Université Catholique de Louvain은 당사의 SpectraMax 흡광 및 Multi-Mode Reader를 사용하여 생물막과 싸우고 있습니다.
UCL의 Wafi Siala에 따르면, "SpectraMax M 시리즈가 제공하는 6~384웰의 다양한 마이크로플레이트 크기를 선택할 수 있다는 것이 또 다른 큰 장점입니다.”
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